RESUMO A tuberculose continua a ser uma das doenças infecciosas transmissíveis mais mortais, causando 1,4 milhão de mortes em 2015 em todo o mundo devido a vários fatores, incluindo o tratamento inadequado e o surgimento de cepas multirresistentes do agente causal, Mycobacterium tuberculosis. Portanto, as drogas desenvolvidas a partir de fontes naturais, como micro-organismos e extratos de plantas, são um alvo freqüente para a pesquisa e descoberta de compostos antimicrobianos. O presente estudo foi um ponto de partida para caracterizar compostos produzidos por um Aspergillus fumigatus isolado de copaíba (Copaifera multijuga) que inibe eficientemente M. tuberculosis, liberando os compostos no caldo de fermentação em condições de cultura específicas. Realizou-se um ensaio preliminar com uma espécie correlata, M. smegmatis, com o objetivo de detectar um efeito antimicrobiano relacionado ao caldo de fermentação de A. fumigatus. O uso direto deste substrato em ensaios de antibiose contra a estirpe H37Rv de M. tuberculosis (ATCC 27294) permitiu a detecção de atividade antimicrobiana com uma concentração inibitória mínima de 256 μg mL-1, demonstrando que os processos de purificação desenvolvidos pelo Biotage Flash Chromatography System são técnicas robustas e confiáveis para purificar compostos de fontes naturais. Além disso, este sistema cromatográfico pode ser usado em combinação com testes bioquímicos específicos, melhorando a busca de resultados confiáveis. Concluímos que esta fração pode expressar uma ampla gama de ação, inibindo ambas as espécies de Mycobacterium utilizadas como organismos-alvo.

ABSTRACT Tuberculosis (TB) remains one of the most deadly communicable infectious diseases, causing 1.4 million deaths in 2015 worldwide due to many conditions, including the inadequate treatment and the emergence of multidrug-resistant strains of the causal agent, Mycobacterium tuberculosis. Therefore, drugs developed from natural sources, as microorganisms and plant extracts, are a frequent target for the research and discovery of antimicrobial compounds. The current study started the characterization of compounds produced by an Aspergillus fumigatus isolated from copaíba (Copaifera multijuga) that efficiently inhibits M. tuberculosis by releasing the compounds into the fermentation broth under specific culture conditions. A preliminary assay was carried out with a correlate species, M. smegmatis, aiming to detect an antimicrobial effect related to A. fumigatus fermentation broth. The direct use of this substrate in antibiosis assays againstM. tuberculosis H37Rv strain (ATCC 27294) allowed the detection of antimicrobial activity with a minimal inhibitory concentration of 256 μg mL-1, demonstrating that purification processes developed by the Biotage Flash Chromatography System are robust and reliable techniques for purification of compounds from natural sources. Also, this chromatographic system can be used in combination with specific biochemical tests, improving the search for reliable results. We conclude that this fraction can express a broad action range, inhibiting both Mycobacterium species used as target organisms.

A Amazônia apresenta alta diversidade de fungos, incluindo Daldinia (Ascomycota, Xylariaceae), cujas espécies produzem metabólitos secundários com reconhecida atividade antimicrobiana e nematicida. O papel ecológico é importante, visto que estromas servem de abrigo para muitos insetos e artrópodes, além de contribuir na degradação da matéria orgânica vegetal. O objetivo desse estudo foi analizar as características taxonômicas e as condições do crescimento micelial in vitro de um espécime de Daldinia coletado na Amazônia brasileira. Estudos morfológicos e moleculares do fungo o indetificaram como D. eschscholtzii. Para avaliação do crescimento micelial o fungo foi cultivado nas temperaturas de 20, 25, 30, 35 e 40 °C e nos meios de cultura extrato de malte-peptona ágar (EMPA), extrato de malte-peptona (EMP), batata dextrose (BD) e meio mínimo (MM). O melhor crescimento micelial ocorreu a 35 °C, entretanto, a maior quantidade de biomassa foi obtida a 25 e 30 °C. O meio BD provou ser o melhor meio para produção de biomassa.

The Amazon has a high diversity of fungi, including species of the genus Daldinia (Ascomycota, Xylariaceae), which produce secondary metabolites with recognized nematicidal and antimicrobial activity. The ecological role of Daldinia is important, as stromata serve as refuges to many insects and arthropodes, and the fungi contribute to the degradation of vegetable organic matter. The aim of this study was to analyze the taxonomic features and mycelial growth conditions in vitro of a Daldinia specimen collected in the Brazilian Amazon. Morphological and molecular studies of the fungus identified it as D. eschscholtzii. To evaluate mycelial growth, we cultivated the fungus at 20, 25, 30, 35, and 40 °C in malt extract-peptone agar (MEPA), malt extract-peptone (MEP), potato dextrose (PD), and minimum medium (MM). The best mycelial growth occurred at 35 °C, although the greatest amount of biomass was obtained at 25 °C and 30 °C. PD proved to be the best medium for biomass production.

A rubelose é uma doença causada pelo fungo Erythricium salmonicolor que atinge muitos hospedeiros, como citros, café, seringueira, eucalipto, Acacia sp., infectando principalmente os galhos. Rubelose é um sério problema para o Brasil, reduzindo a produção de citros em valores próximos de 10%. A diversidade do fungo E. salmonicolor em cultivares brasileiras ainda não foi avaliada. Este trabalho teve como objetivos: i) avaliar a variabilidade genética, por meio de RAPD, de 19 isolados de E. salmonicolor provenientes de diferentes regiões citrícolas de São Paulo e Minas Gerais, ii) avaliar a compatibilidade vegetativa e fusão de hifas do fungo E. salmonicolor. Após a análise por RAPD, foram observados 6 grupos distintos, os quais não apresentaram correlação com o local de origem e espécie hospedeira. No teste de compatibilidade vegetativa, houve encontro de hifas em todos os cruzamentos e 84% destes apresentaram fusão entre elas. Foi verificada compatibilidade entre linhagens, embora não tenha sido observada correlação com os haplótipos. Os resultados observados neste trabalho indicam a importância de futuros estudos sobre a fase sexual do fungo E. salmonicolor, uma vez que a anastomose de hifas precede a formação de heterocário, onde ocorrem os processos de recombinação sexual e parassexual responsáveis pela variabilidade genética em fungos filamentosos.

The Pink Disease is caused by Erythricium salmonicolor, which attacks broad hosts, such as citrus, coffee, rubber, Eucalyptus spp. and Acacia spp., infecting mainly branches. This disease became a serious problem in Brazil, reducing the citrus production up to 10%. However the genetic diversity and compatibility of the fungus E. salmonicolor from Brazilian citrus plants is not yet evaluated. Therefore, the aims of this study were to evaluate: i) the genetic variability of E. salmonicolor in the São Paulo and Minas Gerais States by the RAPD technique, and ii) the vegetative compatibility between these isolates. After RAPD analysis, six distinct groups were observed without correlation between the isolation site or host species. In the vegetative compatibility test, the contact of fungal hyphae between all evaluated crosses was observed, of which 84% presented hyphal fusion. Although the compatibility between strains was observed, no correlation between RAPD haplotypes and hyphal anastomosis was verified. These results show the importance of future studies on the sexual cycle of E. salmonicolor, since hyphal fusion, which precedes the formation of heterokaryons (sexual and parasexual reproduction) that could be responsible for the genetic variability in this species.

Analisou-se o comportamento de 34 linhagens de Lentinula edodes, quando submetidas a diferentes condições de cultivo micelial (pH e temperatura), e a variabilidade das linhagens através de marcadores moleculares RAPD. A caracterização das linhagens foi realizada observando-se o comportamento de cada uma delas quando submetidas a três pHs (5, 6 e 7) e quatro temperaturas diferentes (16, 25, 28 e 37ºC), em função da taxa de desenvolvimento e da retenção de água pelo micélio in vitro. O cultivo micelial foi bem sucedido em todos os pHs utilizados. Já para o fator temperatura, foi estabelecido como faixas ideais para cultivo micelial, aquelas compreendidas entre 25 e 28ºC. O conteúdo hídrico foi menor nas linhagens cultivadas a 37ºC. O padrão de RAPD foi determinado e foram testados 20 primers OPA (Operon Technologies, Inc.), dos quais 17 forneceram boa fonte de polimorfismo (OPA01 a OPA05, OPA07 a OPA14, OPA17 a OPA20). O agrupamento das linhagens baseado nos coeficientes de similaridade permitiu a separação de dois grupos de procedências geográficas distintas.

The growth of thirty-four Lentinula edodes strains submitted to different mycelial cultivation conditions (pH and temperature) was evaluated and strain variability was assessed by RAPD molecular markers. The growth at three pH values (5, 6 and 7) and four different temperatures (16, 25, 28 and 37ºC) was measured using the in vitro mycelial development rate and water retention as parameters. Mycelial cultivation was successful at all pH tested, while the ideal temperature for mycelial cultivation ranged between 25 and 28ºC. The water content was lower in strains grown at 37ºC. Among 20 OPA primers (Operon Technologies, Inc.) used for the RAPD analyses, seventeen presented good polymorphism (OPA01 to OPA05, OPA07 to OPA14, OPA17 to OPA20). The clustering based on similarity coefficients allowed the separation of strain in two groups with different geographic origins.

Cinco espécies de cogumelos comestíveis, Lentinula edodes, Pleurotus ostreatus, Pholiota nameko, Macrolepiota bonaerensis e Agaricus blazei foram avaliadas quanto ao seu potencial em inibir o crescimento "in vitro" da levedura patogênica Candida albicans. Apenas a espécie L. edodes apresentou efeito fungistático sobre este patógeno humano. O composto inibitório foi produzido intra e extracelularmente em cultivo submerso de L. edodes e também estava presente em basidiocarpos frescos e desidratados do cogumelo. O composto fungistático é termossensível e perde sua atividade após 72 horas.

Five species of edible mushrooms, Lentinula edodes, Pleurotus ostreatus, Pholiota nameko, Macrolepiota bonaerensis and Agaricus blazei, were tested for their potential to inhibit the in vitro growth of the pathogenic yeast Candida albicans. Only L. edodes had a fungistatic effect on this human pathogen. The inhibitory compound was produced intra and extracellularly in submersed L. edodes culture, and was also present in fresh and dehydrated mushroom basidiocarps. The fungistatic compound was heat sensitive and lost activity after 72 hours.